PEWARNAAN TULANG PADA EMBRIO

PEWARNAAN TULANG PADA EMBRIO

(alizarine red solution method)

Tujuan : melihat susunan tulang pada embrio.

Bahan :

1.       embrio/ foetus atau hewan kecil

2.      Alkhol 70% atau 95%

3.      Stock solution alizarine red

4.      Glycerol

5.      Acidum acetium glacial (asam asetat) 50 %

6.      Chloral hydrat 1%

7.      KOH 1-2%

8.      Formalin 0,2%

Pembuatan larutan zat warna alizarine red :

-          Campurkan : 50% asam asetat sebanyak 5 ml , glycerol 10 ml, 1% chloral hydrat sebanyak 60 ml, kemudian tambahkan stock alizarine red sampai jenuh.

Pembuatan larutan pencuci (clearing solution)

a.       Clearing solutin 1 : campurkan KOH 1-2% sebanyak 150 ml, formalin 0,2 % sebanyak 100 ml, glycerol sebanyak 150 ml.

b.      Clearing solution 2 :  campurkan KOH 2% sebanyak 100 ml. Glycerol sebanyak 100 ml.

Pewarnaan tulang :

a.       Embrio dimasukan kedalam alkohol 70 % atau 95 % selama 24 jam atau lebih ( lebih lama lebih baik )

b.      Cuci kedalam aquades beberapa menit sampai alkohol hilang.

c.       Masukan kedalam KOH 2 %, kemudian tungu 1-4 jam sampai tulang terlihat (transparan). Proses ini akan lebih cepat bila dilakukan sambil dijemur atau kena lampu. Bila tulang telah terlihat, KOH dibuang , kemudian diganti dengan larutan alizarine red sampai warna merah (ingat untuk mamalia zat warna alizarine red diencerkanya kedalam KOH 1% ).

d.      Bila tulang sudah terwarnai, larutan zat warna tadi dibuang kemudian cuci atau redam dengan clearing solution 1 sampai sisa-sisa warna yang tidak diperlukan larut (± 2 hari ).

e.       Masukan kedalam clearing solution 2 (± 1 hari )

f.       Bila tulang sudah nampak jelas dan baik, masukan kedalam glycerol dan timol supaya tahan lama.